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本生歸納總結(jié)：抗原抗體反應(yīng)原理特點(diǎn)
抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行?？乖贵w反應(yīng)的過(guò)程是經(jīng)過(guò)一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。
由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測(cè)中多以血清為試驗(yàn)材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serological reaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法;也可用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，如微生物及其代謝產(chǎn)物、激素、藥物鑒定等的檢測(cè)
抗原抗體反應(yīng)反應(yīng)特點(diǎn)
抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有四性：即特異性、比例性、可逆性，階段性。
特異性: 是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更加深入和廣泛的應(yīng)用，比如腫瘤的診斷和特異性治療等。
比例性: 是指抗原與抗體發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)，在抗原抗體比例相當(dāng)或抗原稍過(guò)剩的情況下，反應(yīng)最，形成的免疫復(fù)合物沉淀最多、最大。而當(dāng)抗原抗體比例超過(guò)此范圍時(shí)，反應(yīng)速度和沉淀物量都會(huì)迅速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)。
可逆性: 是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。由于抗原抗體反應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合，所形成的復(fù)合物并不牢固，可以隨時(shí)解離，解離后的抗原抗體仍保持原來(lái)的理化特征和生物學(xué)活性。
階段性：抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段，第一個(gè)階段為抗原抗體的特異性結(jié)合階段，此階段是抗原與抗體間互補(bǔ)的非共價(jià)結(jié)合，反應(yīng)迅速，可在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)完成，一般不出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)現(xiàn)象。第二個(gè)階段為可見(jiàn)反應(yīng)階段，是小的抗原抗體復(fù)合物間靠正、負(fù)電荷吸引形成較大復(fù)合物的過(guò)程。此階段反應(yīng)慢，需要時(shí)間從數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)至數(shù)日不等，且易受多種因素和反應(yīng)條件的影響 。
本生抗原抗體反應(yīng)影響因素
電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH 3～5和pH 5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使他們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應(yīng)中，常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。
溫度：抗原抗體反應(yīng)必須在適宜的溫度中進(jìn)行，一般為15～40℃，通常最適為37℃。一定范圍內(nèi)，溫度升高，可促進(jìn)抗原抗體分子問(wèn)的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成，加快可見(jiàn)反應(yīng)的速度，若溫度高于56℃，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞;溫度越低，結(jié)合速度越慢，但結(jié)合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)，對(duì)反應(yīng)溫度有特殊要求，如冷凝集素在4℃左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。
酸堿度：抗原抗體反應(yīng)必須在合適的酸堿度環(huán)境中進(jìn)行，pH過(guò)高或過(guò)低都將影響抗原:抗體的理化性質(zhì)，抗原抗體反應(yīng)的最適酸堿度為pH 6～8。此外，當(dāng)pH達(dá)到或接近顆粒性抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使沒(méi)有相應(yīng)抗體存在時(shí)，也會(huì)引起抗原非特異性凝集，即自凝，造成假陽(yáng)性反應(yīng)，嚴(yán)重影響試驗(yàn)的可靠性。
抗原抗體反應(yīng)反應(yīng)原理
抗體能特異性地識(shí)別相應(yīng)的抗原，并與之結(jié)合。這種結(jié)合在體外也能發(fā)生，這種特性就是許多免疫檢測(cè)方法的基礎(chǔ)?？乖c抗體相互作用是非共價(jià)的，可逆的，其特性符合許多化學(xué)反應(yīng)的基本原理。但因?yàn)榭贵w分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以及抗原分子結(jié)構(gòu)的多樣性，使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)表現(xiàn)出復(fù)雜性 。
交叉反應(yīng)
抗體特異性與交叉反應(yīng)：抗體是特異的。只與相應(yīng)抗原反應(yīng)。實(shí)際制備的抗體卻常有非特異性反應(yīng)，這是因?yàn)榭乖患冊(cè)斐傻摹６嘟M分抗原之間存在共同的抗原決定簇，或者兩個(gè)抗原決定簇結(jié)構(gòu)類似能與同一抗體結(jié)合，均可出現(xiàn)抗體與異源抗原的交叉反應(yīng)。用瓊脂雙擴(kuò)散能簡(jiǎn)便直觀地反映不同抗原與同一抗血清，或不同抗血清與同一抗原的交叉反應(yīng)。
本生抗原抗體反應(yīng)應(yīng)用
抗原：免疫動(dòng)物是制備抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、細(xì)菌或者其他蛋白質(zhì)抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必須與大分子載體連接?？乖挠昧恳暱乖N類及動(dòng)物而異，—次注射小鼠可以少至幾個(gè)微克，免、羊甚至更大的動(dòng)物每次注射的量就相應(yīng)增加，從幾百μg/次至幾mg/次。
佐劑及乳化：佐劑可以幫助抗原在注射部位緩慢釋放，以增加免疫刺激的效果。佐劑有和不佐劑之分。全佐劑加有滅活的分枝桿菌(如卡介苗)或棒狀桿菌。福氏佐劑可從試劑公司購(gòu)買，也可用羊毛脂和石蠟油按1：2—4混合自行制備。佐劑與抗原按1：1的比例混合乳化為均勻的乳液，放置后不會(huì)發(fā)生油水分離。
免疫動(dòng)物：常用于制備抗血清的動(dòng)物如豚鼠、家兔、小鼠、大鼠等，如果大量生產(chǎn)可用動(dòng)物羊、馬等，動(dòng)物接受免疫的乳液量小鼠為1.0—2.0 mL，家兔為2—4mL?？乖庖邉?dòng)物的途徑取決于動(dòng)物種類、抗原特性和是否使用佐劑。腹腔注射(i.p)，肌肉注射(i.m)，皮內(nèi)注射(i.d.)和皮下注射(s.c.)適合于任何抗原，這些途徑主要刺激局部淋巴結(jié)發(fā)生免疫應(yīng)答，初次免疫和免疫加強(qiáng)注射均可使用。靜脈注射(i.v.)則只適合于可溶性抗原及分散的單細(xì)胞懸液，且不能使用佐劑，其誘發(fā)的免疫應(yīng)答主要發(fā)生在脾臟。此外，在單克隆抗體制備時(shí)，亦可用脾臟直接注射或體外免疫方法，尤其對(duì)微量抗原比較實(shí)用。體外免疫方法也常用于人源單克隆抗體的制備。體外免疫時(shí)將脾細(xì)胞或外周血淋巴細(xì)胞(包括B細(xì)胞，T細(xì)胞及抗原遞呈細(xì)胞)與抗原一起作體外培養(yǎng)，然后再與骨髓瘤細(xì)胞融合。初次免疫后要經(jīng)過(guò)2—3次以上的免疫加強(qiáng)以保證能形成較高水平的IgG抗體。兩次免疫注射之間的時(shí)間間隔，一般3—4周比較適合大部分動(dòng)物，小動(dòng)物可間隔10—14d，大動(dòng)物則在2月左右。在免疫加強(qiáng)最后一次注射后的一周內(nèi)采集抗血清，可獲得高水平的抗體 。
抗原抗體 本生生物公司供應(yīng)：ELISA試劑盒,動(dòng)物血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進(jìn)口凍存管,細(xì)胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶,進(jìn)口吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過(guò)濾器等。
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